一、细胞培养条件

细胞名称：NCI-H1975人肺腺癌细胞 生长特性：贴壁生长 冻存条件：无血清冻存液（产品编号：C7001） 培养体系：1640培养基 + 10% FBS 传代方法：首次建议按1:2比例传代，每2天更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，留作过渡培养。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，待其培养至良好状态，再满瓶添加完全培养液并封口，这是运输细胞的最佳方式。清洁细胞瓶外表，用75%酒精消毒后，放入超净台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。用显微镜观察细胞的生长情况并拍摄不同倍数的照片（建议分别拍摄40x、100x和200x），前三天的照片作为重要的售后依据，若未提供照片将默认细胞状态良好。注意，在将密封培养瓶放入培养箱时，需将瓶盖稍微松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基放在37℃、5% CO2孵箱中。如果细胞密度超过80%，则可进行以下传代步骤：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状况，若细胞大部分变圆并脱落，轻敲瓶子并加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
按1:2比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩，待细胞变圆后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（产品编号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直到无结晶出现后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中培养。
次日，更换新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。请将所有培养液收集至离心管，进行离心处理，收集上清以作为过渡培养。在消化细胞后，需按上述步骤重悬细胞并进行分瓶传代。

五、售后条款

Z6·尊龙凯时承诺对细胞出现问题时的售后保障：

若因运输问题导致细胞丢失、瓶身破损等情况，将提供重发服务。
如有污染问题，请在48小时内提供实验结果，核实后可进行重发。
常温和干冰运输的细胞在特定条件下若未存活可申请重发，需提供真实细胞状态照片。
如因客户操作不当导致细胞状况不佳，则不予重发。
收到细胞后需在2天内告知状态，逾期视为合格。

请在细胞培养过程中严格遵循以上步骤与注意事项，以确保细胞的健康与有效性。更多信息，请访问Z6·尊龙凯时官方网站。