本试剂盒仅限于科学研究用途,禁止用于医学诊断。所有实验者需承担由此带来的风险,而Z6·尊龙凯时对此不予负责。该试剂盒专为检测羊免疫球蛋白G2a(IgG2a)而设计,采用了先进的酶联免疫吸附试验(ELISA)技术。
检测原理
本试剂盒采用双抗体一步夹心法的ELISA技术。首先,将预先包被有免疫球蛋白G2a(IgG2a)抗体的微孔板设置好,然后依次加入样品、标准品及HRP标记的检测抗体。在温育并彻底洗涤之后,使用TMB底物显色,TMB在过氧化物酶的催化下由蓝色转变为最终的黄色,颜色的深浅与样品中IgG2a浓度成正相关。最终,将在450nm波长下测定吸光度(OD值),以计算样品浓度。
样本收集及实验步骤
样本的收集方法包括:
- 血清:使用无热原和内毒素的试管进行采血,操作中避免任何细胞刺激,收集血液后以3000转离心10分钟迅速分离血清和红细胞。
- 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂,并在3000转速下离心30分钟取上清。
- 细胞上清液:离心去除颗粒后收集上清。
- 组织匀浆:用生理盐水捣碎组织,并离心处理。
若未能立即检测样本,请按一次用量分装并冻存于-20℃,以防止反复冻融。
自备物品
进行实验所需的设备包括:
- 酶标仪(450nm)
- 高精度加样器及枪头(05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL)
- 37℃恒温箱
操作注意事项
试剂盒应存放在2-8℃,使用前在室温中平衡20分钟。试剂若出现结晶,需水浴加热至溶解。此外,所有液体组分在使用前应充分摇匀,无用的板条应放回自封袋中密封保存。
试剂盒成分及配置
试剂盒包括:
- 微孔酶标板(96孔或48孔配置)
- 标准品(不同浓度)
- 样本稀释液
- 检测抗体-HRP
- 20×洗涤缓冲液
- 底物A和B
- 终止液
- 封板膜和说明书
试剂的准备及稀释
洗涤缓冲液需按照1:20的比例稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水进行配置。
结果判断
结果通过在Excel中绘制标准曲线进行计算,标准品浓度与OD值的关系将用于推算样本浓度。
试剂盒性能
本试剂盒具有较高的准确性、灵敏度和特异性,其中标准品线性回归的相关系数R值≥0.9900,最低检测浓度小于0.1g/L,并且重复性良好,板内、板间变异系数均小于15%。
整个实验过程必须严格按照说明书进行,若有违反操作,后果将由实验者自负其责。对于科研有需求的单位和个人,选择Z6·尊龙凯时的试剂盒,确保结果的可靠性与科学有效性。