Z6·尊龙凯时猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

产品名称

通用名：猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Pseudorabies Virus gE (ELISA)

包装规格

96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

伪狂犬病，又称奥耶斯基氏病（Aujeszky's disease），是由伪狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起的急性传染病，影响家畜及多种野生动物，其特征为发热、剧烈瘙痒、呼吸和神经系统疾病。该病的免疫预防使用的是gE基因缺失疫苗（也可能联用gI、TK基因缺失疫苗）。因此，检测gE蛋白抗体可作为识别野毒感染的指标。本试剂盒用于检测猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白抗体，可有效区分临床野毒感染的猪与使用gE基因缺失疫苗免疫的猪。

原理

该试剂盒包含预包被猪伪狂犬病毒重组gE蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂，使用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清和血浆样本中的伪狂犬病毒gE蛋白抗体。实验中，向酶标板中加入对照血清和待检样本，经过温育后，若样品中含有伪狂犬病毒gE蛋白抗体，则将与酶标板上抗原结合。通过清洗去除未结合的成分后，再加入酶标记物与抗原抗体复合物发生特异性结合。最终，加入TMB底物液后，形成蓝色产物，其显色深浅与样品中特异性抗体含量正相关，待终止反应后产物变为黄色，并使用酶标仪在450nm波长测定各反应孔的吸光值，以确认样品是否含有伪狂犬病毒gE蛋白抗体。

试剂盒组成

本试剂盒的组成如下：

• 酶标记物：11ml×1（红盖）
• 样品稀释液：50ml×1（黄盖）
• 浓缩洗涤液：40ml×1（白盖）
• 底物液A：6ml×1（白盖）
• 底物液B：6ml×1（黑盖）
• 终止液：6ml×1（黄盖）
• 阳性对照：10ml×1（红盖）
• 阴性对照：10ml×1（绿盖）
• 酶标板：96T×1
• 盖板膜：1个
• 自封袋：12个
• 说明书：1份
• 稀释板：1个

储存及有效期

请在2～8℃保存，保质期为12个月。包被板开封后请避光存放于2～8℃，避免潮湿。使用期限为2个月。

适用仪器

需使用具有450nm和630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备及可调微量移液器。

样品准备

1. 取动物全血，采用常规方法制备清亮血清，无溶血或污染。样品在1周内可于2～8℃保存，长期存放需置于-20℃。
2. 用样品稀释液将待检血清按10倍稀释（如在稀释板中加入90μl样品稀释液再加10μl血清，混匀）。阴、阳性对照不需稀释。
3. 浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液（如19份水+1份浓缩洗涤液）。

检验方法

1. 使用前将试剂盒置于室温30分钟，恢复至室温。
2. 取所需酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用完的板条需密封保存于2～8℃。
3. 阴、阳性对照孔分别加入100μl对照液；样品孔每孔加入90μl样品稀释液，再加入10μl稀释后的血清。
4. 混匀，盖好盖板膜，置于37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5. 甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。
7. 洗涤，重复上一步。
8. 每孔依次加入50μl底物液A和底物液B，混匀，盖好盖板膜，置于37℃避光反应10分钟。
9. 每孔加入50μl终止液，混匀，并在450nm（可用630nm作参比波长）测定各孔的吸光值（A值）。

参考值

实验正常情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.60。

检验结果的解释

1. 样品A值≥0.38为阳性；样品A值在0.20到0.38之间为可疑；样品A值＜0.20为阴性。
2. 阳性结果表明该猪可能存在野毒感染，或是使用了非gE基因缺失疫苗免疫。

试验方法的局限性

本检测结果仅供筛查，不应作为确诊依据。

注意事项

1. 实验操作时需佩戴手套和工作服，严格执行消毒隔离制度，实验废弃物应按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3. 酶标板从冷藏取出后需恢复至室温再开袋，未使用完的板条需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4. 浓缩洗涤液在低温时可能结晶，使用前需恢复至室温以完全溶解。
5. 洗涤时各孔均需满液体，以免孔口有游离酶未被洗净。
6. 样品应保持新鲜，结果判定以酶标仪读数为准。
7. 不同批号的试剂组分不得混用。

通过采用Z6·尊龙凯时的检测技术，确保您的实验结果准确可靠，为您提供更科学的养猪医学支持。