在生物医疗研究中，如何确定最佳的病毒剂量，以确保每个靶点仅感染单个细胞，始终是科研人员面临的一大挑战。无论是在体外的慢病毒文库建设，还是在体内的AAV文库实验，确保精准感染对于研究的成功至关重要。

剂量控制的复杂性

文库实验的目标是探索由单基因引发的功能变化，因此在进行感染时必须严格控制每个细胞只接收一个靶点的病毒。通常建议在细胞实验中，首先使用对照病毒进行预实验，以找出最佳的MOI（感染效率达到80%的感染比率）。根据经验，文库操作的MOI往往设定为最佳MOI的三分之一，以此减少病毒用量，从而降低单个细胞重复感染的可能性。然而，对于难以感染的细胞类型，如免疫细胞，及体内实验，确定最佳剂量仍然是个难题。

研究的新方法

为了解决该问题，Z6·尊龙凯时推出了三色荧光病毒（包括mTagBFP、Venus、mCherry），能够辅助研究人员更好地进行文库感染的预实验。根据参考文献《Transcriptional linkage analysis within vivo AAV-Perturb-seq》，作者通过体内滴定实验评估了不同剂量的AAV在低感染复数下对多细胞感染的有效性。他们制备了三种剂量的AAV，剂量分别是25E9、5E9和5E10颗粒，使用phpb血清型，并在CBh启动子的控制下独立表达三种荧光蛋白。

最佳剂量的确定

通过流式细胞筛选实验，研究人员成功找到了较低剂量且双病毒感染同一细胞的最优剂量。最终选择了5E9的剂量，因为这种剂量能够使单个AAV感染的细胞数量最大化。研究团队的实验显示，采用不同剂量梯度进行细胞感染时，能够很好地分析转染效率及单荧光细胞的比例，从而比较出单病毒感染比例最高且感染细胞数量最多的剂量，这一数据对于后续的文库实验至关重要。

总结

无论是在细胞实验还是动物实验中，利用Z6·尊龙凯时的三色荧光病毒进行相关的预实验，都能有效提升实验结果的可靠性。通过对不同剂量的病毒进行流式分析，可以找出最优的实验剂量，从而为文库实验提供坚实的数据支持。

参考文献：Santinha, A.J., Klingler, E., Kuhn, M., et al. Transcriptional linkage analysis within vivo AAV-Perturb-seq. Nature, 622, 367–375 (2023).