一、细胞培养条件

细胞名称: 大鼠肝星形细胞（THSC）
生长特性: 适合在无血清培养液中冻存。
培养体系: DMEM
传代方法: 第一次建议以1:2比例进行传代。
备注: 收集培养基时请使用无菌离心管，以便进行对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买我们的Z6·尊龙凯时全套培养基。

二、细胞处理及培养步骤

收到细胞后，在培养至良好状态后，请灌满全套培养液并封好瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。在处理前，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱内静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行观察。对细胞的生长情况，通过显微镜拍照记录，最好在40x、100x、200x三个倍数下各保存一张照片，前三天的照片将作为售后重要依据，如未提供照片则默认状态良好。

细胞传代步骤

a. 传代: 如果细胞未达到80%汇合度，需收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO₂培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

弃去培养上清，用无钙、无镁的PBS洗涤细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞大部分呈圆形并脱落，则进行终止消化。
轻轻吹打细胞，使其完全脱落，并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），将新培养基加入至每瓶5-8ml后，放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中。

细胞冻存步骤

当细胞生长覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
加入1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩并变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，加入1ml Z6·尊龙凯时无血清冻存液，混匀后装入冻存管。
将冻存细胞放入-80℃冰箱。如需转移至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上，后再转入液氮罐。

细胞复苏步骤

从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基，然后接种至T25培养瓶，在37℃、5% CO₂的培养箱中继续培养。
第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

三、注意事项

部分细胞的粘附力较弱，在运输过程中可能出现脱落现象，这是正常的。若细胞脱落较多，可将培养瓶内的培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。之后添加胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬并消化1-2分钟，终止反应后离心处理。最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并放置于37℃、5% CO₂的培养箱中继续培养。

四、售后条款

Z6·尊龙凯时提供完善的售后服务，若细胞出现以下问题，将予以重发：运输过程中造成的细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等；收到后48小时内如出现污染，请提供真实实验结果以核实；常温或干冰运输的细胞若复苏后存活率低，如提供清晰的细胞状态照片，我们将重发；若第3天内未告知问题，视为产品合格。请务必遵循操作规范以确保细胞质量，未遵循操作或细胞状态不佳的情况我们不予以重发。